肿瘤-睾丸抗原LAGE-1基因的原核表达纯化和抗血清制备

被引：1

作者：

张文敏 ^{[1
]}

张萌 ^{[2
]}

姜桔红 ^{[2
]}

黄爱民 ^{[1
]}

文剑明 ^{[2
]}

机构：

[1] 福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室

[2] 中山大学附属第一医院病理科

来源：

中华肿瘤防治杂志 | 2006年 / 15期

基金：

广州市科技计划项目;

关键词：

肝肿瘤/遗传学; 抗原,肿瘤/生物合成; 睾丸/免疫学; 基因; 抗体; 逆转录聚合酶链反应;

D O I：

10.16073/j.cnki.cjcpt.2006.15.009

中图分类号：

R730.51 [免疫疗法];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX-LAGE-1并测序。将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白。用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔,间接ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并采用Western blot检测GST-LAGE-1多克隆抗体特异性。结果:RT-PCR扩增得到LAGE-1基因3′端264bp片段,测序结果与GenBank公布序列一致;成功构建pGEX-LAGE-1原核表达质粒,含有该质粒的大肠埃希菌经IPTG诱导后表达相对分子质量约为36×103的蛋白,经包涵体复性和GST融合蛋白纯化系统纯化,得到重组蛋白GST-LAGE-1,纯度达90%;制备兔抗GST-LAGE-1抗体,纯化的抗体经Western blot证实可与目的蛋白特异性结合。结论:获得了纯化的肿瘤-睾丸抗原LAGE-1重组蛋白及其特异性多克隆抗体,为进一步研究LAGE-1抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础。

引用

页码：1154 / 1157

页数：4