布鲁氏菌环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法的建立

被引：25

作者：

许邹亮 ^{[1
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南文龙 ^{[1
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周洁 ^{[1
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陆明哲 ^{[1
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郭玉广 ^{[1
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谭鹏飞 ^{[1
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毛开荣 ^{[3
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彭大新 ^{[2
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陈义平 ^{[1
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机构：

[1] 中国动物卫生与流行病学中心诊断液研究室

[2] 扬州大学兽医学院

[3] 中国兽医药品监察所

来源：

中国动物检疫 | 2011年 / 28卷 / 08期

关键词：

布鲁氏菌; 环介导等温扩增(LAMP); 可视化检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

S854.4 [兽医诊断学];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。

引用

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页数：4

共 7 条

[1] 浅谈奶牛布病检测体会 [J].