鼠疫耶尔森氏菌染色体上重要致病相关基因的克隆与表达

目的在大肠杆菌中表达鼠疫耶尔森氏菌染色体编码的重要致病相关基因。方法运用生物信息学技术对鼠疫耶尔森氏菌基因组序列信息进行分析,选定了18个与病原菌粘附、侵袭宿主细胞相关的基因为克隆与表达的目的基因。通过PCR和TA克隆技术从鼠疫耶尔森氏菌基因组中克隆了这些目的基因。上述目的基因经双酶切回收后,分别导入原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基鄄β鄄D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS鄄PAGE)分析和Western blot检测蛋白表达。结果共获得14个可经IPTG诱导的高表达的重组转化子菌株。结论上述重组转化子菌株表达的融合蛋白经进一步纯化可进行宿主感染鼠疫耶尔森氏菌后免疫应答的研究及抗体表达谱变化的研究。这些研究不仅对于鼠疫耶尔森氏菌致病机理的研究有意义,而且在鼠疫疫苗的研制上有重要价值。