体外模拟缺血再灌注诱导神经细胞线粒体功能改变的研究

目的　观察线粒体功能失调在缺血再灌注后神经细胞凋亡中的作用。方法　 ( 1)采用体外培养神经母细胞瘤细胞株N2a,模拟缺血再灌注 (先缺氧缺营养 90min ,然后正常培养不同时间 ) ;( 2 )采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况 ;( 3)通过MTT法、细胞色素C释放和跨膜压的改变判断线粒体的功能 ;( 4 )Cas pase 3活性测定采用水解其可见光底物。结果　 ( 1)N2a细胞缺血再灌注 12h即出现明显DNA片段化 ,2 4h更明显 ;( 2 )线粒体琥珀酸脱氢酶活性缺血再灌注 2 4h明显降低 ;跨膜电位在缺血再灌注 1h先短暂下降 ,3h明显升高 ,6h后降低 ,以后再没回升。缺血再灌注 3h细胞色素C开始释放 ,6h达到高峰 ,并持续到 2 4h ;( 3)Caspase 3活性在缺血再灌注 10h升高 ,2 4h达到高峰。线粒体通透性转换孔抑制剂cyclosporineA只能抑制部分caspase 3的活性和DNA片段化改变 ,而caspase 8抑制剂虽不能完全抑制caspase 3的活性 ,但能完全抑制DNA的片段化。结论　缺血再灌注诱导神经细胞凋亡存在caspase 3依赖性和非依赖性两条途径 ,线粒体功能失调在缺血再灌注引起的N2a细胞凋亡过程中可能起到凋亡早期的启动和随后的信号放大作用