人单链抗体亲和力成熟研究附视频

目的　探索基因工程抗体亲和力体外成熟新技术 ,获得抗血管内皮生长因子高亲和力的抗体 ,使之成为肿瘤血管靶向治疗的载体。方法　采用错配PCR和单链重叠延伸法 ,随机突变抗体重链可变区 ,建立次级噬菌体单链抗体突变库 ,并从中筛选出高亲和力单链抗体突变株。结果　抗体突变株不仅保留了母体抗体的特异性 ,而且亲和力明显提高。根据基因序列分析 ,高亲和力突变株中有 4个氨基酸发生了改变 ,分别是Trp38→Cys38,Gln45 →Arg45 ,Lys1 0 7→Arg1 0 7,Arg1 0 9→Leu1 0 9。抗体立体结构模拟显示其中 3个氨基酸突变位于抗原结合部位。结论　实验结果为抗血管内皮生长因子人源单链抗体的应用奠定了基础 ,同时为抗体结构与功能研究以及抗体亲和力体外成熟提供了参考模型。