nNOS介导小鼠局灶性脑梗死后氧化DNA损伤的机制研究

目的探讨还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)阳性神经元表达与脑梗死后DNA损伤修复过程的相关性。方法制作小鼠前脑缺血-再灌注模型(FbIR),夹闭双侧颈总动脉90 min后恢复血流,再灌注15min后处死动物制作脑组织冰冻切片。A组(n=10):FbIR90/15 min;B组(n=4):FbIR90/15 min+3BR7NI;C组(n=10):假手术对照组;D组(n=4):采用组织化学染色法观察NADPH-d阳性神经以元的分布。A、B两组分别用大肠杆菌核苷酸外切酶Ⅲ敏感位点法(escherichia coliexonucleaseⅢsensitive sites,EXOSS)检测AP位点和3-′PO4末端型两种氧化DNA损伤。用EXOSS检测AP位点和3-′PO4末端型两种氧化DNA损伤;采用组织化学染色法观察NADPH-d阳性神经元的分布。结果EXOSS法可检测到大脑不同部位的氧化DNA损伤,主要集中在大脑皮质区、下丘脑弓形核区、纹状体和海马区;特异性NOS抑制剂3BR7NI明显减弱全脑的EXOSS信号强度(P<0.000 1),差异有显著性,其作用主要表现在大脑皮质区,而对下丘脑的弓型核等区作用较弱;NADPH-d阳性神经元主要分布在大脑皮层、纹状体、丘脑和齿状核,下丘脑的弓型核区仅见少量染色,EXOSS/NADPH-d的表达对比显示,在大脑皮质区EXOSS信号主要在NADPH-d阳性神经元中。结论脑梗死后大脑不同区域氧化DNA损伤的机制不一,3BR7NI仅消除大脑皮层区的EXOSS染色,而对下丘脑弓形核区的作用不大,本研究从形态学证实了大脑皮层区nNOS可能参与了脑梗死后氧化DNA损伤修复过程,而下丘脑的弓型核区的这一过程可能有其他机制参与。