香豆雌酚对大鼠骨髓基质干细胞增殖和成骨分化的调控研究

目的观察香豆雌酚(coumestrol)对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells BMSCs)增殖和成骨分化的影响,探讨香豆雌酚对骨髓基质干细胞的调节及其对骨骼系统的影响。方法用不同浓度(0,10-10～10-5mol·L-1)香豆雌酚干预6～8周雌性SD大鼠的骨髓基质干细胞,并设17β-E2(17β雌二醇,10-8mol·L-1)为阳性对照,在干预不同时间分别用MTT法测细胞增殖率、Vonkossa染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、酶消化法测羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量、放免法测骨钙素(Osteocalcin,OC)含量。并用Western-Blot法测干预7天时骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)蛋白的表达,用Realtime-PCR法测干预7天、14天时OPG、RANKL(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,核因子κB受体活化因子配基)基因的表达。结果①细胞增殖:干预24、48、72h,10-8、10-7mol·L-1香豆雌酚均能显著促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖,而10-5mol·L-1香豆雌酚在干预24、72h抑制细胞增殖。②成骨分化:10-8mol·L-1香豆雌酚干预25天后开始出现钙化结节;10-8、10-7mol·L-1香豆雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加、Hyp在28天时显著增加,10-8mol·L-1香豆雌酚干预组OC表达在28天时显著增加,高浓度(10-5mol·L-1)则呈现抑制作用。③OPG/RANKL表达:干预7、14天,10-7mol·L-1香豆雌酚能增加骨髓基质干细胞OPG mRNA及其蛋白的表达,提高OPG/RANKL基因的相对表达。结论香豆雌酚能促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化,并能通过影响OPG/RANKL的表达来发挥骨骼系统的保护作用。