植物药提取剂丹皮酚影响人大肠癌细胞凋亡及调控基因p53的表达

目的:体外实验观察植物药提取剂丹皮酚作用后大肠癌细胞的凋亡情况,分析其与凋亡调控基因p53的关系。方法:实验于2004-09/2005-07在武汉大学人民医院消化病研究所完成。常规于培养瓶内培养人大肠癌HT-29细胞株,待其进入对数生长期后分为丹皮酚溶液15.63mg/L,62.5mg/L,250mg/L组和对照组,分别加入15.63mg/L,62.5mg/L,250mg/L的丹皮酚溶液(购自上海第一制药厂)及等量培养液。以倒置显微镜和苏木精-伊红染色法观察细胞形态学、DNA末端原位标记染色法和流式细胞仪技术检测细胞凋亡,从而定性、定量分析丹皮酚与大肠癌细胞凋亡的关系,通过免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因p53的表达情况。结果:①丹皮酚溶液15.63mg/L,62.5mg/L,250mg/L组大肠癌细胞株HT-29的凋亡指数分别为(8.16±2.24)%,(15.35±3.07)%及(23.70±3.42)%,均显著高于对照组[(3.32±0.41)%(P<0.01)],且凋亡指数与丹皮酚浓度呈正相依赖关系。②丹皮酚使细胞周期分布发生明显变化,表现为S期细胞比例上升,G0/G1期和G2/M期细胞比例下降。③丹皮酚溶液15.63mg/L,62.5mg/L,250mg/L组大肠癌HT-29细胞株p53基因的阳性表达率分别为(87.6±10.10)%,(83.7±9.43)%及(77.4±8.22)%,均显著低于对照组[(90.2±8.04)%(P<0.05～0.01)],此作用与丹皮酚浓度呈反比关系。结论:丹皮酚在一定的浓度范围内可诱导大肠癌细胞发生凋亡,该作用可能与其影响癌细胞的细胞周期、下调凋亡相关基因p53的表达有关,且呈一定的剂量依赖性。