多重实时PCR对宫颈癌及癌前病变HPV-16病毒整合状态的检测

目的探讨检测HPV存在状态的理想方法,了解HPV-16整合在宫颈癌发生发展中的作用及其可能的临床应用价值。方法用多重实时PCR同管定量检测HPV-16的E2和E6基因,根据E2/E6判定HPV-16的存在状态;与Southern杂交检测结果进行比较。检测HPV-16阳性的宫颈鳞癌51例和宫颈上皮内瘤病变49例的石蜡标本。结果(1)多重实时PCR所得HPV-16E2、E6标准曲线的相关性好,扩增效率均高于95%;(2)确定多重实时PCR以E2/E6比值为0.81作为区分游离型和混合型HPV-16的界值;(3)多重实时PCR与Southern杂交检测的符合率为81.5%(Kappa值为0.844,P<0·001);(4)HPV-16整合发生率与不同程度的宫颈病变有关,CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC中HPV-16整合发生率分别为42.9%、76.5%、83.3%和90.2%;(5)Ⅱ+Ⅲ期宫颈癌中整合型HPV-16所占比例(88.0%)显著高于Ⅰ期宫颈癌(33.3%)。结论多重实时定量PCR是检测HPV-16病毒存在状态的可靠方法,有准确、省时、简便快速及高通量的优点。