具有抗HIV活性的天花粉蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

被引：5

作者：

安群星 ^{[1
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徐志凯 ^{[1
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黎志东 ^{[1
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穆士杰 ^{[2
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张献清 ^{[2
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吴兴安 ^{[1
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机构：

[1] 第四军医大学医学微生物教研室

[2] 第四军医大学西京医院输血科

来源：

生物技术通讯 | 2006年 / 02期

关键词：

天花粉蛋白; 人类免疫缺陷病毒; 原核表达; 纯化;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的:天花粉蛋白(TCS)有较强的抗HIV活性。利用基因工程技术在大肠杆菌中表达TCS并进行纯化。方法:从新鲜栝楼叶片中获取TCS基因组DNA,利用PCR技术扩增其全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3)得到工程菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹鉴定;用Ni-NTA柱对所获目的蛋白进行纯化。结果:获得了目的蛋白的可溶性高效表达,并通过了Western印迹鉴定。经Ni-NTA柱纯化后,得到大量均一的6His-TCS融合蛋白。结论:TCS在大肠杆菌中的表达与纯化,为通过基因工程方法研制具有抗HIV活性的药物奠定了基础。

引用

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