柱花草单粒种子DNA提取和RAPD扩增

以7个柱花草品种的单粒种子为材料,采用改良的CTAB法提取DNA,进行RAPD扩增。结果表明,采用单粒种子提取的DNA完整性好。采用模板3μL,随机引物2μL(10μmol/L),dNTPs2.5μL(2mmol/L),Taq酶0.2μL(5U/μL),MgCl2溶液2μL(25mmol/L),10×Buffer2.5μL(500mmol/LKCl,100mmol/LTris-Cl,pH9.0,25℃,10mL/LTritonX-100),无菌水12.8μL,总体积为25μL的反应体系,可扩增出谱带清晰的RAPD产物。扩增程序为:94℃预变性4min;94℃变性30s、37℃复性30s、72℃延伸90s,共40个循环;72℃延伸6min。