葡萄糖转运蛋白对大鼠肾小球系膜细胞己糖胺通路的影响

目的　探讨己糖胺通路 (HBP)在葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)基因转染系膜细胞功能改变中的作用。方法　利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞 ,以 β 半乳糖苷酶转染细胞 (MCLacZ)为对照。用 2 脱氧 3 H 葡萄糖 (2 DG)测定细胞葡萄糖摄入 ,流式细胞仪分析细胞表型和纤维连接蛋白 (FN)的合成 ,采用比色法测定HBP限速酶———谷氨酰胺 :6 磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性 ,RT PCR检测细胞GFAT基因的表达。结果　MCGT1的 2 DG摄入率明显高于MCLacZ〔(741.0± 6 0 .5 )dpm/ μg蛋白质vs (92 .2± 9.0 )dpm/ μg蛋白质 ,P <0 .0 1〕 ,动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的 3.7倍 ,而两者Km值无明显差别。MCGT1的GFAT活性明显高于MCLacZ〔(3.2 5± 0 .2 5 )OD3 65·μg蛋白质-1·30min-1·10vs (1.15± 0 .16 )OD3 65·μg蛋白质 -1·30min-1·10〕 ,而两者GFAT的mRNA表达差异无显著性。GFAT的抑制剂———重氮丝氨酸能够改善MCGT1的肥大状态和FN合成。结论　GLUT1的过度表达伴随系膜细胞HBP活性的增加 ,该糖代谢通路的活化与系膜细胞表型及其功能改变有关。