大鼠胚胎上胚层干细胞的分离培养研究

被引:1
作者
邓新燕 [1 ]
杨景超 [1 ,2 ]
陆杰 [1 ]
聂恩琼 [1 ,2 ]
张应涛 [1 ,2 ]
郭中敏 [1 ]
机构
[1] 中山大学实验动物中心
[2] 中山大学公共卫生学院
基金
广东省科技计划;
关键词
上胚层; 多分化潜能; 上胚层干细胞; 活化素;
D O I
暂无
中图分类号
Q813.11 [];
学科分类号
摘要
目的获取SD大鼠胚胎中附植后的胚胎上胚层干细胞(Epi SCs),并就影响SD大鼠Epi SCs(SDEpi SCs)分离与培养的组织来源、胎龄、细胞因子等条件进行探讨,从而探索适宜SD大鼠Epi SCs分离培养的实验体系,为下一步SD大鼠Epi SCs的建系提供实验研究基础。方法以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,分别取5.5日胎龄的囊胚和7.5日胎龄囊胚上胚层(Epiblast),用添加白血病抑制因子(LIF)或活化素(activin)的基础培养基进行原代培养,分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代培养。最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并检测其体外分化能力。结果培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化。培养于LIF培养基中的Epiblast也发生了严重的自发分化,而在activin培养基中,Epiblast形成SDEpi SCs原代集落。经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SDEpi SCs。结论利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.5日胎龄SD大鼠胚胎中获得SDEpi SCs。
引用
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页码:606 / 609+718 +718
页数:5
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