利用报道基因检测鼻咽癌细胞的RNA干扰作用

被引：7

作者：

尹志华

任彩萍

李峰

蒋卫红

杨旭宇

冯湘玲

姚开泰

机构：

[1] 中南大学肿瘤研究所,中南大学肿瘤研究所,中南大学肿瘤研究所,中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科,中南大学肿瘤研究所,中南大学肿瘤研究所,中南大学肿瘤研究所湖南长沙广东医学院附属深圳福田医院香蜜湖分院风湿病研究所,湖南长沙,湖南长沙,湖南长沙,湖南长沙,湖南长沙,湖南长沙

来源：

癌症 | 2005年 / 03期

关键词：

鼻咽肿瘤; RNA干扰; 绿色荧光蛋白; 荧光素酶;

D O I：

暂无

中图分类号：

R739.63 [咽肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)具有高效特异阻断基因表达的特点,在基因功能研究、信号转导通路的研究以及基因治疗中得到很广泛的应用。本实验通过体外转录合成siRNA和构建表达shRNA的质粒载体两种方法,检测鼻咽癌细胞系的RNAi作用,建立一个较完善的RNAi技术平台。方法:体外转录合成或通过pSUPER.retro构建表达针对GFP和荧光素酶的siRNAs或shRNAs,将它们和报道基因一起瞬时转染HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞,用荧光显微镜和Westernblot检测GFP表达情况;用荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性。结果:3'末端带UU突出的siGFP2和psGFP能特异性地抑制细胞中GFP的表达,而单链反义RNA和3'末端不带UU突出的siGFP1无此作用。定量荧光素酶活性分析发现,siLuc能抑制HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞中荧光素酶的表达,其抑制率分别达到91.43%,78.01%,90.30%和62.85%。HeLa细胞瞬时转染psLuc后,荧光素酶的表达抑制率可达到78.22%。结论:体外转录合成的siRNA和表达shRNA的质粒均能诱发RNAi效应。3'UU突出末端在siRNA诱发的RNAi中起作用。鼻咽癌细胞与HeLa细胞一样存在RNAi效应。

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页数：5

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