纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定

被引：12

作者：

余榕捷

谢秋玲

洪岸

汪炬

孙奋勇

机构：

[1] 暨南大学生物工程研究所,暨南大学生物工程研究所,暨南大学生物工程研究所,暨南大学生物工程研究所,暨南大学生物工程研究所广东广州,广东广州,广东广州,广东广州,广东广州

来源：

中国病理生理杂志 | 2003年 / 06期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

纳豆激酶; 溶源性; 基因表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的 :利用基因工程技术 ,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌。方法 :利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原 (pro-NK)基因 ,并克隆到表达载体pET3c上 ,构建表达pro -NK和载体上 2 2氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK ;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL2 1(DE3)pLysS-和BL2 1(DE3)pLysS+ ,获得表达菌pENK - (DE3)pLysS-和pENK - (DE3)pLysS+ 。利用SDS -PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性。结果 :SDS-PAGE显示两株菌株均表达 4 2kD的目的蛋白。纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性。在pENK -(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导就有基础表达 ,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解 ,菌落中空 ,表明表达产物具细胞毒作用。结论 :本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro -NK融合蛋白 ,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础。

引用

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