STAT1反义寡核苷酸雾化吸入转染博莱霉素致肺纤维化大鼠模型的建立与鉴定

目的:探讨信号转导和转录活化因子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入体内转染博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的可行性并给予鉴定。方法:取Wistar大鼠20只,气管内灌注BLM7天后,将大鼠随机分为生理盐水(NS)组、脂质体(liposome,LP)组、ASON组、5’端异硫氰酸荧光素(FITC)标记的STAT1-ASON(FITC-ASON)组各5只。FITC-ASON组大鼠于气管内灌注BLM后第7天,雾化吸入脂质体包埋全硫代磷酸修饰并5’端FITC标记的STAT1-ASON后6小时处死大鼠,通过支气管肺泡灌洗收集细胞,用荧光显微镜观察灌洗液细胞和肺组织内STAT1-ASON的分布。NS组、LP组、ASON组3组大鼠则于气管内灌注BLM后第7、9、11、13天分别雾化吸入生理盐水、脂质体、脂质体包埋的STAT1-ASON复合物,3组大鼠于第14天处死,通过支气管肺泡灌洗收集肺泡巨噬细胞(AM),用实时荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)检测AM中STAT1、ICAM-1mRNA的表达;用Western-blot检测AM中STAT1、ICAM-1蛋白的表达;并检测大鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)。结果:大鼠雾化吸入5’端FITC标记的STAT1-ASON后,其支气管肺泡灌洗液细胞和肺组织中可见诱发的黄绿色荧光且主要位于AM内;NS组AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达水平(1.003±0.116、1.008±0.114;0.66±0.09、0.72±0.10)与LP组(1.063±0.121、1.000±0.157;0.68±0.11、0.65±0.11)比较差异无统计学意义(P>0.05);ASON组(0.267±0.036、0.269±0.042;0.31±0.09、0.38±0.07)与NS组及LP组比较,AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);ASON组、NS组及LP组3组肝肾功能指标两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脂质体包裹的STAT1-ASON雾化吸入能够到达AM和肺组织内,用于体内实验是安全的;STAT1-ASON体内转染后,能抑制AM中STAT1、ICAM-1mRNA蛋白的表达,说明STAT1-ASON雾化吸入体内转染致肺纤维化动物模型是可行的。