黄瓜花叶病毒CP基因原核表达及抗血清的制备

被引：9

作者：

秦云霞

曾华金

刘志昕

田娥

机构：

[1] 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室

[2] 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室海口

[3] 海口

来源：

中国生物工程杂志 | 2004年 / 08期

关键词：

黄瓜花叶病毒; 外壳蛋白; 原核表达; 酶联免疫吸附试验;

D O I：

10.13523/j.cb.20040816

中图分类号：

S436.421 [黄瓜病虫害];

学科分类号：

090401 ; 090402 ;

摘要：

把黄瓜花叶病毒 (CMV)西番莲分离物的外壳蛋白 (CP)基因 ,通过BamHI SacI位点定向插入pET 2 2b( + )载体 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,经IPTG诱导下 37℃培养 6h ,SDS PAGE电泳示表达蛋白分子质量为 31 8kDa ,表达量占菌体总蛋白的 2 8 9%,表明该蛋白得到了高效表达。用冰冷的氯化钾溶液显色 ,用表达的特异蛋白质条带制备抗原 ,免疫家兔制备出病毒特异抗血清。采用ID ELISA测定抗血清效价为 1 0 -6;抗血清和CMV几个分离物均有特异反应 ,和TMV、菌体蛋白不发生非特异性反应 ;检测病毒灵敏度达 30ng ml,能够从稀释 31 2 5倍的感病植物汁液中检测出病毒

引用

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共 11 条

[1] 大肠杆菌表达系统表达载体的类型及其研究进展 [J].