抗组织因子途径抑制物单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）单克隆抗体。方法：用微量ＴＦＰＩ脾内包埋免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＦＰＩ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为４Ｆ４和４Ｆ８。对其中的一株４Ｆ８进行研究，其杂交瘤细胞染色体众数为９３，分泌的抗体为ＩｇＧ１。以简易正辛酸法从腹水纯化ＭｃＡｂ４Ｆ８，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测其纯度，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析显示其可特异性地识别分子量为３４８００的抗原分子。对纯化的抗体以改良过碘酸钠氧化法用辣根过氧化物酶标记后，采用双夹心ＥＬＩＳＡ法检测正常人血浆ＴＦＰＩ含量。结果：稀释的凝血酶原时间（ＰＴ）测定，ＭｃＡｂ４Ｆ８可缩短其凝固时间，且呈量效关系，ＭｃＡｂ４Ｆ８还可使乏因子Ⅸ血浆稀释的ＰＴ明显缩短。正常人血浆ＴＦＰＩ含量为１０３．２±１１．５μｇ／Ｌ，结果与美国Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ公司的ＴＦＰＩＥＬＩＳＡ试剂盒所测结果（９８．４±１０．３μｇ／Ｌ）相近（ｒ＝０．９２）。结论：ＭｃＡｂ４Ｆ８有潜在的药用价值，并可望为我国ＴＦＰＩ的研究提供精确的检测手段。