可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox的构建与表达

被引：2

作者：

李俊刚

陈耀凯

王宇明

机构：

[1] 第三军医大学西南医院全军感染病研究所

来源：

中国现代医学杂志 | 2007年 / 04期

关键词：

永生化; 载体; 基因; 回复;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的探讨以hTERT作为永生化基因、嘌呤霉素乙酰转移酶基因puro作为筛选基因、加强型绿色荧光蛋白EGFP作为报道基因、loxP作为重组位点构建可回复性永生化逆转录病毒载体,为建立可回复性永生化细胞株奠定基础。方法用NheⅠ酶切线性化pBABE-puro产生两个相同的黏端,与loxP双链混合连接构建成载体pBABE-puro-lox;用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切下逆转录病毒载体pBABE-hTERT-puro上约3.5kbhTERT基因片段,插入pBABE-puro-lox载体的相应酶切位点之间,重组的新载体称为phTERTPlox;扩增出无终止密码子的EGFP基因片段并插入phTERTPlox,正确构建的载体命名为phTERTGPlox。转染包装细胞PT67并用嘌呤霉素选择培养,在荧光显微镜下观察绿色荧光细胞,免疫组化染色检测hTERT基因的表达。结果EcoRⅠ和NheⅠ双酶切鉴定phTERTGPlox形成4.0kb和5.3kb两个片段,转染PT67细胞荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光细胞,免疫组化染色结果显示稳定转染的细胞胞核呈阳性染色。结论成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox。

引用

页码：437 / 441

页数：5