人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究

研究了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦα）及其突变体［Ｌｙｓ２］ 人肿瘤坏死因子［Ｌｙｓ２］ ｒｈＴＮＦα）的基因工程下游工艺。ｒｈＴＮＦα和［Ｌｙｓ２］ ｒｈＴＮＦα的温控表达工程菌株在Ｂ．ＢｒａｕｎＥ１０型１５Ｌ自控罐中经发酵每升可得５０ｇ湿菌体。ｒｈＴＮＦα和［Ｌｙｓ２］ ｒｈＴＮＦα的表达水平仍能保持在５０％以上，且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀，然后依次用ＤＥＡＥ ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ、ＣＭ ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ ２００柱层析进行分离纯化，由每升发酵液菌体最终可得１ｇ左右的纯品，纯度达到９８％左右，ｒｈＴＮＦα的比活为～１５×１０８ＩＵ／ｍｇ，［Ｌｙｓ２］ ｒｈＴＮＦα的比活为～６×１０８ＩＵ／ｍｇ。