大黄素对人结肠癌HT-29细胞体外增殖的抑制作用

目的观察大黄素对人结肠癌细胞株HT-29体外增殖的抑制作用。方法取对数生长期的HT-29细胞,按每孔5×103个细胞接种于96孔板,贴壁24 h后换液,分为对照组和实验组(分别含有12.5μM、25μM、50μM、100μM大黄素),共5组。每组均设6个复孔,于37°C、5%CO2孵箱中分别培养24 h、48 h和72 h。采用MTT比色法检测细胞活力;倒置显微镜显像观察细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;分光光度法检测Caspase-3酶蛋白活性。结果①MTT比色法显示,处理24 h时,与对照组比较,大黄素50μM、100μM组细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05),而大黄素12.5μM、25μM组抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,处理48 h及72 h后大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理48 h及72 h后的抑制率与同浓度组处理24 h比较,抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05);大黄素各浓度组处理72 h后的抑制率与同浓度组处理48 h比较抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。②倒置显微镜观测显示,对照组多为类圆形成团生长,经各浓度大黄素处理后,细胞体积缩小、间隙变大,细胞数减少。③流式细胞仪检测显示,对照组G2/M期细胞比率明显高于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组G0/G1期细胞比率明显高于大黄素25μM、50μM、100μM浓度组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组与12.5μM大黄素组G0/G1期细胞比率差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞比率明显低于大黄素各浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,大黄素12.5μM、25μM、50μM、100μM组HT-29细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。④与对照组比较,大黄素各浓度组Caspase-3酶蛋白活性显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抑制人结肠癌细胞株HT-29体外增殖,其作用呈浓度、时间依赖性;大黄素能够阻滞HT-29细胞周期,并激活Caspase-3诱导细胞凋亡。