多联实时荧光PCR定量方法检测四种肠道细菌的研究

被引：14

作者：

彭雁忠

贾宏

邹虹

李瑜

黄君美

肖性龙

黄胜中

林镜中

机构：

[1] 北京大学深圳医院

[2] 深圳太太基因工程有限公司

来源：

中国热带医学 | 2005年 / 05期

关键词：

空肠弯曲菌; 肠出血性大肠杆菌O157:H7; 副溶血性弧菌; 单核细胞增生李斯特菌; 多联; 荧光PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R446.5 [微生物学检验];

学科分类号：

摘要：

目的建立一种能同时检测空肠弯曲菌(CJ)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7、副溶血性弧菌(VP)和单核增生李斯特菌(LM)的多联实时荧光PCR定量方法。方法根据CJ的C基因序列、EHECO157:H7的RFBE基因序列、VP的toxR基因序列和LM的iap基因序列的开放阅读框(ORF),分别利用ABIprimerexperess2·0和DNAStar中的PrimerSelect软件设计出了数对特异性的引物和探针,筛选出最佳的各组引物和探针组合,对引物、探针的浓度、Mg2+浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,从而建立了检测临床标本中CJ、O157:H7、VP和LM的多联荧光PCR反应体系和检测方法。结果实验显示该方法具有特异性强,灵敏度高,均达到100copies/ml。结论多联实时荧光PCR方法可定量检测临床标本中CJ、O157:H7、VP和LM,该法快速简便,准确高效,有利于上述病原菌所致疾病的早期诊断和治疗。

引用

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