目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素。方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成。取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞。观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线。将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中。加Dulbecco修正Eagle’s基础培养液培养24h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两三次。每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle’s基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle’s(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值。用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44。人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中。每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72h后换成Dulbecco修正Eagle’s基础培养液,以后每3d换液1次。观察细胞在各组中变化情况,诱导12d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色。结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性。Dulbecco修正Eagle’s培养液比先进的Dulbecco修正Eagle’s培养液更适合于这类细胞生长。经10μmol/L5-氮胞苷诱导48h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上。结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中能够大量扩增。②并表达CD25,CD105,CD166和CD44等细胞表面标志。③10μmol/L5-氮胞苷诱导48h对该细胞向心肌细胞分化有明显促进作用。
