微小毛霉凝乳酶的纯化和性质

微小毛霉(Mucor pusillus)凝乳酶经乙醇分步沉淀、CM-纤维素、DEAE-Sephadex A25和Sepharose 2B柱层析提纯后,酶的比活由296提高到3429u/mg,蛋白质收率为17.9%。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫扩散法证明酶的纯度达到均一。酶的分子量为41800道尔顿。酶对血红蛋白的Km值为0.019mmol/L。酶的等电点为pH4.3。对酶的氨基酸组成和含糖量也进行了测定。酶的化学修饰表明:酪氨酸、组氨酸、色氨酸、精氨酸以及巯基与酶的活性无关,天冬氨酸的羧基是酶的必需基团,故此酶是一种典型的天冬氨酸蛋白酶。