不同年龄兔软骨细胞培养和形态学研究

目的:研究兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察不同年龄兔软骨细胞的形态学特性。方法:无菌条件下,从不同年龄新西兰白兔的四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,传代培养。应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定,利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态,激光共聚焦扫描显微镜检测软骨细胞直径。结果:培养2 d3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形;8 d左右,细胞融合成层。甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性。透射电镜观察显示,随兔年龄改变,关节软骨细胞的超微结构也有所差异。用激光扫描共聚焦显微镜对其直径进行检测,显示三组细胞的直径两两之间都有差别,即成年软骨细胞直径大于幼年软骨细胞直径,小于老年软骨细胞直径（P<0.001）。结论:本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第2代细胞生长良好,适合于实验研究;不同年龄兔软骨细胞的形态结构有所改变,为了解骨性关节炎的发展变化提供一定依据。