依达拉奉对过氧化氢刺激神经细胞的保护作用及机制研究

目的探讨依达拉奉对神经元的保护作用及其保护机制。方法提取胎龄16～18 d的孕大鼠皮层组织,消化、离心后培养,鉴定神经元细胞纯度90%以上。实验共分为3组:空白对照组、过氧化氢（H2O2）处理组（300μmol/L刺激0.5、2、6及12 h）,依达拉奉预处理组（刺激前预防性应用500μmol/L保护30 min,分组同H2O2处理组）。电镜观察线粒体形态的变化,流式细胞仪检测凋亡细胞的比率,免疫印迹及免疫沉淀检测凋亡关键蛋白的活性及蛋白间的关系。结果相比依达拉奉预处理组,H2O2处理组相同时间点的线粒体明显呈水泡样肿胀变及空泡样变。H2O2处理组刺激后0.5、2、6及12 h细胞凋亡比率分别为14.40%±1.23%、45.50%±2.81%、56.40%±3.53%、62.50%±4.23%;与空白对照组比较神经元凋亡明显增加（F=274.8,P<0.01）。依达拉奉预处理组相应时间点的细胞凋亡比率分别为0.90%±0.07%、1.10%±0.08%、3.50%±1.90%、12.60%±1.10%;与H2O2处理组比较明显降低（F=362.7,P<0.01）。刺激0.5 h后,磷酸化c-Jun氨基端激酶（p-JNK）、细胞质中细胞色素C、线粒体膜上B细胞白血病-淋巴瘤-2相关X蛋白（BAX）表达水平开始明显升高,直至12 h时达到顶峰;与此同时,细胞质中B细胞白血病-淋巴瘤-2关联死亡蛋白（BAD）、磷酸化BAD、BAX和14-3-3水平表现为持续性降低,而这些改变在依达拉奉预处理组均被抑制。结论作为一种自由基清除剂,依达拉奉可能通过抑制JNK的活性、抑制BAD与14-3-3分离及抑制BAX选择性地由细胞质向线粒体移位来保护神经细胞。