西黄丸含药血清经Wnt信号转导通路细胞周期蛋白D1调控人肺癌干细胞增殖的机制

目的:研究西黄丸含药血清经Wnt信号转导通路关键蛋白细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)调控人肺癌干细胞增殖的机制。方法:10只日本大耳白兔随机分为5组,西黄丸浸出液高、中、低剂量组按32,16,8 g·kg-1·d-1ig,空白组给以等量生理盐水ig;环磷酰胺(CTX)组按7.5 mg·kg-1·d-1ip,各组连续给药3 d后腹主动脉采血,离心,获得含药血清。体外培养人肺腺癌细胞系(LAC),应用流式细胞荧光激活(FACS)技术,筛选鉴定具干细胞特性的SP细胞(side population cells)。50只C57BL/6小鼠分西黄丸高、中、低剂量组,CTX组,模型组5组,SP细胞以培养基稀释调整瘤细胞密度1×107/mL,于每只小鼠右腋皮下接种0.2 mL瘤细胞悬液,每组分别给予西黄丸药液32,16,8 g·kg-1·d-1ig,等量生理盐水ig和CTX7.5 mg·kg-1·d-1,ip,连续14 d,处死小鼠,剥取瘤块称瘤重,并计算抑瘤率。SP细胞密度调至2×106/mL,分别种入培养瓶,设西黄丸高、中、低剂量组,CTX组,空白组5组,分别加入如前所述制备的各组血清(血清、培养液体积比30%),培养24 h后上流式细胞仪检测各组细胞周期。按同样方法制备5组SP细胞,加入各组含药血清培养24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)法分别检测Cyclin D1 mRNA及蛋白表达。结果:与模型组相比,西黄丸高、中剂量组和CTX组瘤重明显降低(P<0.01);与空白组30%血清比较,西黄丸高、中剂量30%含药血清组和CTX 30%含药血清组G1期细胞数量比例明显增高,S期、G2期细胞数量比例明显减少(P<0.05);与空白组30%血清比较,西黄丸高、中剂量30%含药血清组及CTX 30%含药血清组Cyclin D1 mRNA及蛋白表达均明显低于空白血清组(P<0.05,P<0.01)。结论:西黄丸可通过抑制Wnt信号通路中关键蛋白Cyclin D1表达,阻止肺癌干细胞从G1向S期转化,从而达到抑制肺癌细胞增殖的作用。