流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能

目的确立采用流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的实验条件,以提供一种快速、准确和敏感的方法评价保健食品对吞噬功能的影响。方法取昆明种小鼠巨噬细胞,与荧光素标记大肠杆菌于37℃避光孵育1.5h,与荧光微球于4℃,25℃及37℃避光孵育1.5h或于37℃避光孵育0.5,1.0,1.5和2h后,用流式细胞仪观察和分析腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球或荧光素标记大肠杆菌的能力。吞噬百分率(PP)表示吞噬一个或多个荧光微球的巨噬细胞占巨噬细胞总数的百分比;吞噬指数(PI)表示平均每个巨噬细胞吞噬荧光微球的数量;或吞噬荧光素标记大肠杆菌实验中,在M1处每个巨噬细胞的平均荧光强度(FI)。为验证和确定实验条件的可靠性,取昆明种小鼠每日经口分别给予蛹虫草菌丝体或灵芝孢子油30d后,取腹水巨噬细胞,分别与荧光微球或荧光素标记E.colik-12于37℃,培养1.5h后用流式仪进行吞噬功能的检测。结果25℃及37℃孵育条件时,PP分别为(28.0±1.4)%和(44.0±3.3)%,显著高于4℃的结果;1.5h及2.0h孵育时间,PP分别为(34.9±4.0)%和(39.5±11.3)%,显著高于0.5h及1.0h的结果。25～37℃孵育1.5～2.0h是合适的孵育条件。37℃孵育未加重组小鼠IFN-γ(rmIFN-γ)刺激时,PP为33.8%,PI为1.80,经rmIFN-γ处理后,PP为73.6%,PI为2.64,吞噬功能明显增强。0.15,0.30及0.90g.kg-1蛹虫草菌丝体处理组PP和0.30及0.90g.kg-1蛹虫草菌丝体处理组PI均较阴性对照组显著提高。0.33和1.00g.kg-1灵芝孢子油处理组M1处的FI显著高于阴性对照组。结论流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能是一种灵敏、简便、准确而高通量的定量评价保健食品影响吞噬功能的方法。