GatewayTM系统快速构建番木瓜环斑病毒CP基因反向重复序列表达载体

被引：6

作者：

姜玲

秦长平

伏卉

机构：

[1] 华中农业大学园艺林学学院国家果树脱毒种质资源室内保存中心,教育部园艺植物生物学重点实验室

来源：

农业生物技术学报 | 2008年 / 03期

关键词：

关健词:番木瓜环斑病毒; 反向重复序列; 重组; GatewayTM;

D O I：

暂无

中图分类号：

S432.41 []; S188 [农业生物工程];

学科分类号：

090401 ; 071007 ; 0828 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

设计含有attB侧翼序列的引物,用于番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus)的外壳蛋白基因(CP)基因的PCR扩增。在BP重组酶的作用下,将CP基因与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与目的载体pHellsgate12发生重组反应,再进行平板培养筛选及PCR扩增和酶切反应。结果证明,用限制性内切酶XhoⅠ酶切消化后,琼脂糖凝胶电泳获得了预期长度为1700bp的重组片段;以启动子和外壳蛋白基因及外壳蛋白基因和终止子序列为基础,分别设计2对引物,经PCR扩增分别获得582和773bp片段。结果表明,获得了含有内含子的CP基因反向重复结构的表达载体。

引用

页码：526 / 529

页数：4

共 8 条

[1] 地高辛(DIG)和碱性磷酸酶标记cDNA探针检测PRSV [J].

姜玲 ;

张红艳 ;

张明涛 ;

刘小梅 ;

伏卉 .

农业生物技术学报, 2007, (03) :496-502

[2]

dsRNA-mediated resistance to Beet Necrotic Yellow Vein Virus infections in sugar beet ( Beta vulgaris L. ssp. vulgaris )[J] . Britt-Louise Lennefors,Eugene I. Savenkov,Jan Bensefelt,Elisabeth Wremerth-Weich,Petra Roggen,Stig Tuvesson,Jari P. T. Valkonen,Jan Gielen.Molecular Breeding . 2006 (4)

[3] Hairpin RNA-mediated silencing of Plum pox virus P1 and HC-Pro genes for efficient and predictable resistance to the virus [J].