p21WAF1基因介导诱发的人肝癌细胞系的细胞凋亡研究

被引:10
作者
杨帆
王文亮
曹云新
王冰峰
机构
[1] 第四军医大学病理学教研室
[2] 第四军医大学中心实验室
关键词
肝肿瘤;癌.肝细胞;肿瘤细胞.培养;基因.p21WAF1;基因转移;细胞凋亡;细胞周期;
D O I
10.19401/j.cnki.1007-3639.1997.03.005
中图分类号
R735.7 [肝肿瘤];
学科分类号
摘要
目的研究外源性p21WAF1基因超表达对HCC-9204肝癌细胞系的作用和意义。方法通过脂质体介导方式将带有人全长p21WAF1cDNA和潮霉素抗性基因的真核表达载体PCEP转入肝癌细胞中,用潮霉素筛选后,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测p21蛋白的表达情况,使用流式细胞仪检测细胞周期并判定有无细胞凋亡及程度。通过透射电镜进一步观察细胞的超微结构。结果ELISA法测定p21蛋白表达结果,对照组、空载体组和WAF1组的吸光度(A)值分别为0.175±0.02、0.183±0.03和0.33±0.04,提示转基因后p21蛋白量却明显增加(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞周期表明G1期细胞显著增加,并在G1期前出现一凋亡峰,凋亡细胞占细胞总数的22.5%。透射电镜可见WAF1组部分细胞体积缩小,细胞完整,有出芽现象,细胞器结构完整,致密的染色体边集于核膜内侧,呈明显的凋亡细胞的形态。结论本实验成功地将p21WAF1基因转入到培养的肝细胞中,获得了稳定表达p21蛋白的细胞株;外源性p21WAF1基因的超表达可引起肝癌细胞自发凋亡。通过对该基因的进一步研究可为肝癌防治提供理论依据。
引用
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