成人成骨细胞体外培养

目的　改良成人成骨细胞消化培养方法 ,以满足在细胞学水平进行骨代谢性疾病研究的需要。　方法　取无菌骨碎片 ,先用胰蛋白酶消化多次 ,以去除血细胞和成纤维细胞 ;骨片经短期培养后 ,再次使用胰蛋白酶消化 ,得到大量纯净成骨细胞。细胞长至汇合后生成黑色结节。分别采用NPP底物法、12 5I标记放射免疫 (RIA)法和Ⅰ、Ⅲ型胶原顺序沉淀抽提、SDS -PAGE还原电泳法测定细胞上清中成骨细胞主要特征性分泌物 :大量碱性磷酸酶 (AKP)、骨钙素 (OCN)和Ⅰ型胶原。　结果　黑色结节经四环素染色 ,荧光显微镜下观察为骨结节特征性的金黄色。成骨细胞上清中AKP分泌量为 (2 76± 0 5 6 )IU/ml、OCN分泌量为 (1 875± 0 5 49)ng/ml,明显高于成纤维细胞 (P <0 0 1)。可检测到Ⅰ型胶原而无Ⅲ型胶原。　结论　此改良方法可以在短期内得到大量性状稳定成骨细胞 ,同时避免成纤维细胞混入。