大豆单染色体的显微分离及体外扩增

采用玻璃针分离法，通过显微操作器成功地分离到大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个０．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，经Ｓａｕ３Ａ酶切，并在染色体ＤＮＡ片段两端加上Ｓａｕ３Ａ人工接头后，进行两轮ＰＣＲ扩增，得到０．３～３ｋｂ之间的ＤＮＡ片段。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组ＤＮＡ之间有同源性，从而证明两条单染色体ＤＮＡ确实已被成功地扩增了，同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离，为小型单染色体ＤＮＡ的体外扩增及微克隆奠定了基础。