中棉所36均一化全长cDNA文库的构建与鉴定

被引：14

作者：

吴东

刘俊杰

喻树迅

范术丽

宋美珍

机构：

[1] 中国农业科学院棉花研究所/农业部棉花遗传改良重点实验室

来源：

作物学报 | 2009年 / 35卷 / 04期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

花发育; 均一化; cDNA文库;

D O I：

暂无

中图分类号：

S562 [棉];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

以短季棉中棉所36(CCRI 36)顶端分生组织和花蕾为材料,以DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMART(switching mechanism at 5′end of RNAtranscript)建库技术相结合,构建CCRI 36花发育期均一化全长cDNA文库。经检测原始文库滴度为1.7×106cfumL-1。随机挑取100个克隆,利用PCR方法测得文库重组率达100%,插入片段平均长度为1.2kb。以两个高丰度表达基因Histon3和UBQ7为探针,进行虚拟Northern blot检测显示,其丰度在均一化cDNA中均明显降低,说明均一化效果显著,为节约筛库成本和EST有效测序奠定了基础;同时,利用常规PCR扩增技术从cDNA文库中筛选阳性信号,获得了花发育相关蛋白基因。初步证实CCRI36花发育期均一化全长cDNA文库构建成功,为深入研究棉花花发育机理及发掘与早熟相关的功能基因奠定了基础。

引用

页码：602 / 607

页数：6

共 6 条

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