TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒

被引：19

作者：

卢亦愚

严菊英

冯燕

徐昌平

史雯

茅海燕

机构：

[1] 浙江省疾病预防控制中心

来源：

Virologica Sinica | 2006年 / 05期

基金：

浙江省自然科学基金;

关键词：

荧光定量RT-PCR; TaqMan-MGB探针; H5亚型禽流感病毒(AIVH5);

D O I：

暂无

中图分类号：

S854.43 [];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量RT-PCR方法,用于检测H5亚型禽流感病毒。针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异性、敏感性与准确性;并通过体外克隆技术建立病毒基因拷贝数进行定量分析。结果表明:引物与探针的优化浓度分别640nmol/L和480nmol/L,体系具有良好的保守性和特异性,与其他呼吸道病毒均无交叉反应。方法检测灵敏度为100拷贝/反应,标准曲线线性范围为107～102拷贝/反应,从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重现性好。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行H5亚型禽流感病毒的快速定量检测。

引用

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