单克隆抗体双抗体夹心ELISA快速检测肝炎患者血清中TIMP-2

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的双抗体夹心ELISA法,探讨血清TIMP-2的水平与肝纤维化病程进展程度的关系。方法确定包被TIMP-2单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-2 McAb的最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法。并用于临床初步检测408例肝炎血清TIMP-2水平。结果包被TIMP-2 McAb的最佳工作浓度为2μg/ml,HRP标抗体的最佳工作浓度1∶400。该法具有良好的重复性,灵敏度达5 ng/ml,中和抑制率在80%以上,稳定性能好,与国外TIMP-2 ELISA试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有良好的相关性(Y=1.2752X-4.7465,r=0.976)。临床检测表明TIMP-2随着病损纤维化程度加重而升高,与正常人血清TIMP-2水平相比差异显著(P<0.01～0.001)。结论该法能够快速检测人血清中TIMP-2浓度,血清TIMP-2可作为定量诊断肝纤维化指标之一。本试验为国内TIMP-2诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据。