绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

目的在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)为标记基因的合适条件。　方法用带有GFP突变体的质粒转染到表达细胞 ,观察GFP瞬时表达的情况 :1 直接测定GFP在COS- 7细胞中的表达并观察表达的稳定性 ;2 比较不同启动子驱动的 pcDNA3 - EGFP和 pSVK3 -S6 5T两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率 ;3 用LacZ基因与GFP基因共转染 48h后 ,通过FACS分选测定两种基因在同一细胞中的表达情况。　结果在不同条件下的活细胞中有GFP基因表达 ,且表达具有稳定性 ,表达持续约 2周左右 ;CMV启动子和SV4 0 启动子调控的GFP对不同肿瘤细胞株的转染效率有差异。当两种基因共转染后用FACS分选 ,选出GFP细胞带有LacZ基因细胞在 1∶4时可达 85 %以上。　结论通过GFP表达可连续而直接地观察活细胞中的基因表达 ,利用GFP可快速地挑选带有靶基因的细胞。