多重PCR快速检测金黄色葡萄球菌四型肠毒素基因的研究

[目的]建立一种快速、高效地检测金黄色葡萄球菌SEA、SEB、SEC和SED基因的多重PCR法并进行优化。[方法]试剂盒提取产肠毒素金黄色葡萄球菌基因组DNA作为模板,根据SEA、SEB、SEC和SED肠毒素基因片段保守区序列设计引物,多重PCR扩增产肠毒素金黄色葡萄球菌基因组中特异靶序列。对反应体系Mg2+浓度、引物浓度和退火温度进行优化,并初步检测方法特异性。[结果]在PCR反应体系中加入设计的4对引物可同时扩增出金黄色葡萄球菌四型肠毒素基因中的特异序列;在总体积为25μl的反应体系中,最优Mg2+浓度为2.0mmol/L,引物浓度分别为0.2μmol/L,退火温度为49℃;以大肠杆菌O157︰H7和肠炎沙门菌510041基因组DNA为模板扩增不出特异片段。[结论]成功建立金黄色葡萄球菌四型肠毒素基因多重PCR法,该法能快速、高效地同时检测SEA、SEB、SEC和SED基因,比传统PCR方法省时省力,可以弥补传统PCR法的不足。