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幽门螺杆菌HspA融合蛋白口服疫苗的构建
被引：5
作者：
李明峰
何志勇
凌贞
王娇阳
沈旭东
杨冠珍
吴祥甫
机构：
[1] 中国人民解放军第四五五医院!上海
[2] 中国科学院上海生物化学研究所
[3] 上海
[4] 中国人民解放军第四五五医院
[5] 中国科学院上海生物化学研究所!上海
来源：
关键词：
幽门螺杆菌;
热休克蛋白A亚单位;
霍乱毒素B亚单位;
融合蛋白;
口服疫苗;
D O I：
暂无
中图分类号：
R186 [预防接种、计划免疫、药物预防];
学科分类号：
100401 ;
摘要：
构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原成分热休克蛋白A亚单位 (HspA)和霍乱毒素B亚单位 (CtxB)的重组融合蛋白的生物工程菌株 ,以此制备幽门螺杆菌的口服疫苗。用PCR方法扩增hspA和ctxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至 pSK(+ )质粒上 ,然后插入含T7启动子pET 2 2b(+ )的表达载体中 ,构建含双基因的表达质粒 pET hct,转化E .coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT。经测序 ,hspA ctxB(hct)融合基因片段由 72 6bp组成 ,可以编码 2 42个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE和免疫印迹分析检测发现 ,融合基因表达的蛋白质相对分子质量约为 30kD。融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后 ,和HspA共同标记同位素12 5I ,然后给小鼠灌胃 ,结果观察到HCT组小鼠血清中的12 5I的放射量要明显高于HspA组 (P <0 .0 0 1) ,且吸收峰值时间明显提前。融合蛋白中的CtxB可明显促进小鼠对HspA的吸收 ,HCT融合蛋白可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的候选口服疫苗
引用
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