副溶血弧菌的磁珠捕获及检测

被引：6

作者：

王报贵 ^{[1
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武晓丽 ^{[2
]}

董素琴 ^{[1
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陈飞 ^{[1
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陈星星 ^{[1
]}

甘敏 ^{[1
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明星 ^{[1
]}

徐锋 ^{[1
]}

机构：

[1] 南昌大学生命科学与食品工程学院中德联合研究院

[2] 江西中医学院基础医学部

来源：

食品工业科技 | 2013年 / 34卷 / 13期

关键词：

副溶血弧菌; 多克隆抗体; 免疫磁珠; PCR;

D O I：

10.13386/j.issn1002-0306.2013.13.047

中图分类号：

TS207.4 [食品的微生物检验];

学科分类号：

083201 ;

摘要：

建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。

引用

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