靶标替换消减SELEX技术筛选小鼠IgG Fc片段的DNA配基及其活性鉴定

被引：4

作者：

陈桦 ^{[1
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葛廷 ^{[2
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王小琦 ^{[3
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廖世奇 ^{[3
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马瑾 ^{[3
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王黎 ^{[3
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庞鑫 ^{[1
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张宁 ^{[2
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张丽琼 ^{[2
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张洁瑜 ^{[1
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王晓清 ^{[1
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机构：

[1] 兰州大学生命科学学院

[2] 兰州理工大学生命科学学院

[3] 甘肃省医学科学研究院

来源：

兰州大学学报(自然科学版) | 2011年 / 47卷 / 01期

关键词：

靶标替换; SELEX; DNA配基; 小鼠IgG Fc片段; 特异性;

D O I：

10.13885/j.issn.0455-2059.2011.01.021

中图分类号：

Q819 [生物工程应用];

学科分类号：

0836 ; 090102 ;

摘要：

建立高特异性和亲和力的小鼠IgGFc片段DNA配基筛选方法.采用几种小鼠IgG亚类(鼠抗HBV-IgG、小鼠IgG的Fc,IgG1,IgG2a)作为靶分子,利用靶标替换消减SELEX筛选方法进行16轮筛选.利用dot-blot,高压液相色谱以及凝胶阻滞(EMSA)方法对所得配基进行活性鉴定.经过16轮筛选,得到了与小鼠IgG不同亚类相同Fc片段特异性结合的寡核苷酸配基(IgG的Fc配基).特异性分析显示,此配基只与小鼠IgG特异性结合,与胰蛋白酶、小牛血清白蛋白、人血清均无明显结合.高压液相色谱和凝胶阻滞结果均说明了配基和靶蛋白具有特异结合.通过使用靶标替换消减SELEX技术可以有效得到小鼠IgG不同亚型相同部分Fc片段的特异性结合配基,为不同分子相同部位的分子作用机制,以及应用于小鼠抗体亲和层析的研究奠定基础.

引用

页码：66 / 72

页数：7

共 6 条

[1] Antibody-specific aptamer-based PCR analysis for sensitive protein detection [J].

Yoshida, Yoshihito ;

Horii, Katsunori ;

Sakai, Nobuya ;

Masuda, Hiromi ;

Furuichi, Makio ;

Waga, Iwao .

ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, 2009, 395 (04) :1089-1096

[2]

A microfluidic SELEX prototype.[J].Glen Hybarger;Joseph Bynum;Robert F. Williams;James J. Valdes;James P. Chambers.Analytical and Bioanalytical Chemistry.2005, 1

[3] FluMag-SELEX as an advantageous method for DNA aptamer selection [J].