绿僵菌分解昆虫外壳蛋白酶MAP-21的纯化与特性

以蝉蜕为底物诱导绿僵菌产生分解昆虫外壳蛋白酶。发酵液经超滤、UltrogelAcA54凝胶层析、制备IEF电泳 ,纯化了一种蛋白酶MAP - 2 1 ,SDS -PAGE电泳后经银染色呈单带。该酶的Mr为 2 7kD左右 ,pI为 7 6。它的特异识别氨基酸为Arg,其活性可被PMSF和TLCK抑制 ,表明其活性中心有Ser和His残基。它还可被胰蛋白酶的典型抑制剂Leu peptin、Antipain及STI等所抑制 ,而胰凝乳蛋白酶抑制剂TPCK和胰凝乳弹性蛋白酶抑制剂TEI对其活性无影响。专一底物和抑制剂特性试验结果表明MAP - 2 1是类胰蛋白酶。此外 ,该酶还可被EDTA所抑制 ,表明金属离子为其活性所必需。另外还研究了MAP - 2 1的最适作用温度和 pH ,以及温度耐受性等特性。