FKBP12.6重组腺病毒载体的构建及其心肌细胞感染效率测定

被引：6

作者：

李德

伍卫

周淑娴

机构：

[1] 中山大学附属第二医院心内科

来源：

中山大学学报(医学科学版) | 2006年 / 03期

基金：

中国博士后科学基金;

关键词：

FKBP12.6; 腺病毒载体; 心肌细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

R541 [心脏疾病];

学科分类号：

1002 ; 100201 ;

摘要：

目的构建携带FKBP12.6基因的重组腺病毒载体以研究FKBP12.6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用。方法将平端化的FKBP12.6片段连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV构建重组穿梭质粒pAdTrack/FKBP12.6,用XhoI单酶切进行鉴定。采用电穿孔法将线性化pAdTrack/FKBP12.6转化AdEasier-1细菌,产生重组腺病毒质粒pAdEasy-1/FKBP12.6。采用脂质体介导法用线性化pAdEasy-1/FKBP12.6转染293细胞,从病变的293细胞分离、纯化重组腺病毒Ad.FKBP12.6;采用PCR方法对其进行鉴定。用重组腺病毒感染乳鼠心肌细胞,在荧光显微镜下计算GFP阳性细胞百分率。结果在病变293细胞的冻融上清中含有重组腺病毒Ad.FKBP12.6,其滴度为1.5×1012pfu/mL。当感染复数(MOI)为75时,感染效率可达100%。结论成功构建了携带FKBP12.6基因的重组腺病毒载体;Ad.FKBP12.6可高效感染乳鼠心肌细胞。本研究为进一步探讨FKBP12.6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用奠定了基础。

引用

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