天花粉蛋白诱导黑色素瘤凋亡机制的研究

目的:研究天花粉蛋白(TCS)对黑色素瘤B-16细胞的作用,探讨天花粉蛋白抗肿瘤的机制。方法:(1)应用单细胞电泳及Hoechst33258染核形态观察来研究TCS对黑色素瘤B-16细胞损伤作用。(2)应用激光共聚焦扫描显微术结合特异性荧光探针Fluo-3/AM、H2DCF-DA和DAF-FM diacetate观察在TCS作用下,单个瘤细胞内钙离子(Ca2+)、一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的信号动态变化,并探讨细胞内ROS和NO的增加与钙离子的关系。结果:(1)终浓度50mg/L TCS孵育3h、6h后,单细胞电泳、Hoechst33258染色的核形态观察未发现与对照组有明显区别;孵育12h后单细胞电泳可见DNA损伤的特征性现象-彗星尾巴;Hoechst33258染色的核形态观察发现有明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体。(2)终浓度50mg/L的TCS可引起细胞内Ca2+、NO和ROS的生成量明显高于对照组(P<0.01)。细胞内ROS和NO的增加与钙离子的增加密切相关。结论:天花粉蛋白对黑色素瘤B-16细胞DNA具有较强损伤作用,可诱导其发生凋亡;天花粉蛋白诱导凋亡可能与细胞内钙、ROS和NO的增加有关。