利用Red重组系统对大肠杆菌ClpP基因的敲除

被引：27

作者：

白光兴

孙志伟

黄莺

俞炜源

机构：

[1] 军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所北京,北京,北京,北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2005年 / 01期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

ClpP; FLP重组酶; FRT位点; Red重组酶;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2005.01.007

中图分类号：

Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

利用含有质粒pKD4 6的菌株BW2 5 113,在阿拉伯糖诱导后 ,表达λ噬菌体的 3个重组蛋白 ,宿主菌就具有了同源重组的能力 .设计的引物 5′端有 5 0bp的拟敲除基因的同源臂 ,3′端为扩增引物 ,以pKD3为模板 ,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因 ,将此线性片段电转入具重组功能的感受态细胞 ,利用氯霉素平板就可以筛选到阳性转化体 .再利用表达Flp重组酶的质粒pCP2 0 ,可将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除 .利用该重组系统 ,构建了ClpP蛋白酶缺失的大肠杆菌工程菌株 ,可望在减少外源蛋白的降解方面发挥一定的作用 .

引用

页码：35 / 38

页数：4

共 6 条

[1]

Recombinogenic engineering-new options for cloning and manipulating DNA. Muyrers J P P,Zhang Y,Francis A. Trends in Biochemical Sciences . 2001

[2] 大肠杆菌重组工程 [J].

白光兴 ;

孙志伟 ;

俞炜源 .

生物技术通讯, 2003, (05) :410-412

[3]

Recombineering: A powerful new tool for mouse functional genomics. Copeland N G,Jenkins N A,Court D L. Nature Reviews Genetics . 2001

[4]

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[6]

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