高效液相色谱法测定人血清游离羟脯氨酸的含量

目的:建立血清游离羟脯氨酸的高效液相色谱外标测定法。无需对衍生产物进行处理即可使羟脯氨酸与血清中18种氨基酸达到良好的分离。方法:使用邻苯二甲醛(OPA)和芴甲基氯甲酸酯(FMOC)双衍生剂法,对血清进行处理后采用ODS C18柱,以醋酸钠缓冲液和乙腈的为流动相进行梯度洗脱,紫外检测器于265nm进行测定。结果:日内、日间RSD分别为1.95%和2.02%,回收率为(100.5±4.0)%,标准曲线在0.26～64mg.L-1范围线性关系良好(R2=0.999 8)。使用该方法对10名健康志愿者进行了血清中游离羟脯氨酸的测定,测得男性平均值为(1.4±0.5)mg.L-1、女性平均值为(1.10±0.32)mg.L-1。结论:该法无需除去血清中一级胺衍生产物,直接测定羟脯氨酸,处理简单且特异性好,方法简单经济,适合临床检测需要。