大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

被引:18
作者
蔡丹 [1 ,2 ]
郑易之 [1 ,2 ]
兰英 [1 ,2 ]
机构
[1] 深圳大学生命科学学院
[2] 深圳市微生物基因工程重点实验室
关键词
大豆; LEA1基因; Em蛋白; 大肠杆菌; 根癌农杆菌转化; 转基因烟草; 盐胁迫;
D O I
暂无
中图分类号
S565.1 [大豆];
学科分类号
0901 ;
摘要
将大豆Em(LEA1)基因构建到原核表达载体pET28-Em中.转化大肠杆菌,经SDS-PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定.结果显示,经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白.这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性.在含800 m mol/L NaC l培养基中,含空载体的对照菌生长迟滞期约为50 h,含Em基因的重组菌生长迟滞期为32 h,表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性.在此基础上,构建了含Em基因的真核表达载体pB I-Em.再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草.PCR及RT-PCR结果显示,大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中,并能正常转录.转化率为53%.转Em基因烟草植株在含有质量分数1.5%NaC l的培养基中生长状况好于对照植株,叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片.结果表明,大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性.
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孙立平 ;
李德全 .
生物技术通报, 2003, (06) :5-8+13
[2]  
分子克隆实验指南[M]. 科学出版社 , (美)J.萨姆布鲁克(JosephSambrook),(美)D.W.拉塞尔(DavidW.Russell)著, 2002
[3]  
植物生理学[M]. 高等教育出版社 , 潘瑞炽, 1984
[4]  
Wheat LEA genes, PMA80 and PMA1959, enhance dehydration tolerance of transgenic rice ( Oryza sativa L.)[J] . Zaiquan Cheng,Jayaprakash Targolli,Xingqi Huang,Ray Wu.Molecular Breeding . 2002 (1)
[5]   The wheat LEA protein Em functions as an osmoprotective molecule in Saccharomyces cerevisiae [J].
Swire-Clark, GA ;
Marcotte, WR .
PLANT MOLECULAR BIOLOGY, 1999, 39 (01) :117-128
[6]   Identification of sequence homology between the internal hydrophilic repeated motifs of Group 1 late-embryogenesis-abundant proteins in plants and hydrophilic repeats of the general stress protein GsiB of Bacillus subtilis [J].
Stacy, RAP ;
Aalen, RB .
PLANTA, 1998, 206 (03) :476-478
[7]   A CDNA-BASED COMPARISON OF DEHYDRATION-INDUCED PROTEINS (DEHYDRINS) IN BARLEY AND CORN [J].
CLOSE, TJ ;
KORTT, AA ;
CHANDLER, PM .
PLANT MOLECULAR BIOLOGY, 1989, 13 (01) :95-108