重组人表皮细胞生长因子缓释微球治疗糖尿病大鼠溃疡

目的制备重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)缓释微球,并对其形貌、释药行为和在体外促进细胞增殖的能力进行评价;同时比较rhEGF缓释微球与rhEGF原液对糖尿病大鼠溃疡促愈作用的差异。方法(1)用改进的复乳法制备rhEGF缓释微球。透射电镜检测rhEGF微粒形貌表征,激光粒度仪/Zeta电位仪分析微球粒径分布,ELISA法测定rhEGF微球释药行为。(2)以小鼠成纤维细胞L929细胞系为对象,采用MTT法鉴定rhEGF缓释微球的生物学活性。(3)制备糖尿病大鼠溃疡模型,成模后采用随机数字表法将大鼠分为4组:rhEGF缓释微球组(A组)、rhEGF原液组(B组)、空白微球组(C组)、PBS溶媒对照组(D组),每天给药1次。分别于给药后3,7,14,21 d对溃疡创面照相计算创面愈合率。创缘皮肤取材,测定羟脯氨酸含量,免疫组化检测β1整合素和角蛋白-19并测量其阳性染色面积比。结果(1)rhEGF缓释微球平均粒径为193.5 nm,粒径分布均匀,微球之间无粘连,分散性好。释药过程符合Higuchi释放动力学模型,释放时间长达24 h。(2)不同浓度rhEGF缓释微球均有促进小鼠成纤维细胞增殖的作用,其中以10μg/L浓度促小鼠成纤维细胞增殖的作用最强。(3)从治疗第7天开始,愈合率以A组最快,A组与其他三组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。羟脯氨酸含量、β1整合素和角蛋白-19阳性染色面积比A组均高于B组。结论用改进的复乳法制备的rhEGF缓释微球,粒径大小分布均一,释放时间长达24 h。rhEGF缓释微球促进糖尿病大鼠溃疡创面愈合速度较rhEGF原液更快,溃疡创面愈合质量更高。