新生SD大鼠心肌细胞培养方法的简化及改良

目的改良简化心肌细胞培养的条件和方法,培养纯度高、存活时间长的新生SD大鼠的心肌细胞。方法采用含牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的Ⅱ型胶原酶单次消化心肌、差速贴壁1 h纯化心肌细胞进行培养,全过程在37℃条件下进行。于培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测细胞的存活率,并在生物倒置显微镜下观察形态学变化。取培养48 h的细胞,用免疫组织化学染色的方法检测心肌细胞的纯度。结果心肌组织在6 h时基本消化完全。培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测心肌细胞的存活率均大于95%,培养30 d时仍为95.2%。在生物倒置显微镜下观察,培养24 h左右的细胞之间形成交联并有细胞搏动。培养48h的细胞经免疫组织化学染色法测定,心肌细胞的纯度为(97.1±1.9)%。结论应用改良并简化的心肌细胞培养方法和培养条件,可得到纯度和存活率均高能满足大多数科研要求的原代乳鼠心肌细胞。