小鼠γ-干扰素真核表达质粒的构建和鉴定

被引：2

作者：

胡晓文

李建国

机构：

[1] 中山大学附属第二医院呼吸内科

[2] 中山大学附属第二医院呼吸内科广州

[3] 广州

来源：

现代临床医学生物工程学杂志 | 2003年 / 06期

关键词：

γ-干扰素; 真核表达质粒; 定向克隆; 序列分析;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的　克隆小鼠γ -干扰素 (γ -IFN)基因 ,构建并鉴定小鼠γ -干扰素真核表达质粒 .方法　从BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,用RT -PCR方法扩增出小鼠γ -干扰素基因 ,分别用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切扩增片段和pcD NA3.1(- ) ,定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(- ) ,构建成真核表达质粒pcDNA3.1(- )γ -IFN .转化产物通过PCR扩增筛选 ,双酶切鉴定 ;阳性克隆进行序列分析 .结果　RT -PCR产物电泳可见一约 5 0 0bp大小目的片段 .PCR和双酶切电泳结果均证实已插入约 5 0 0bp的γ -IFN基因片段 ;阳性克隆测序结果表明克隆的小鼠γ -干扰素基因完全正确 .结论　成功构建了小鼠γ -干扰素真核表达质粒 ,为进一步气道内实施哮喘小鼠基因治疗打下了坚实基础 .

引用

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