人胰岛素在甲醇酵母Pichiapa storis中的分泌表达附视频

被引：18

作者：

王燕

梁镇和

张友尚

崔大敷

冯佑民

机构：

[1] 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室

[2] 中国科学院上海生物化学研究所!上海

来源：

生物化学与生物物理学报 | 1999年 / 05期

关键词：

重组人胰岛素; 猪胰岛素前体; 甲醇酵母Pichiapastoris; 表达体系;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q578 [胰岛素及胰高血糖素];

学科分类号：

摘要：

将猪胰岛素前体（ＰＩＰ）基因和在其５′端引入９个氨基酸的间隔肽序列的ＰＩＰ基因（ｓｐＰＩＰ）插入到Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ的分泌表达质粒ｐＰＩＣ９中，得到分泌表达质粒ｐＰＩＣ９／ＰＩＰ和ｐＰＩＣ９／ｓｐＰＩＰ并用以转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓＧＳ１１５。用点杂交筛选，获得高拷贝转化子Ｐ３９（ｓｐ）和Ｓ５１（＋ｓｐ）。经１Ｌ摇瓶培养，Ｐ３９和Ｓ５１在Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ中分泌表达ＰＩＰ和ｓｐＰＩＰ的量分别为１０ｍｇ／Ｌ和４０ｍｇ／Ｌ。ｓｐＰＩＰ在Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ中的表达水平高于其在本实验室报道的Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ和Ｋ．ｌａｃｔｉｓ中的表达，表明间隔肽的引入有助于提高ＰＩＰ的表达。用１０Ｌ罐发酵ｓｐＰＩＰ表达量达２５０ｍｇ／Ｌ。ＰＩＰ和ｓｐＰＩＰ经转肽得到重组人胰岛素，其受体结合能力与猪胰岛素相同，体内生物活力２７ＩＵ／ｍｇ。

引用

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